在微生物實(shí)驗(yàn)室中，常需保存-些實(shí)驗(yàn)中常用的標(biāo)準(zhǔn)菌種及菌株，如金黃色葡萄球菌，致病性大腸桿菌，幾種常見的沙門氏菌，痢疾桿菌等，以供學(xué)生進(jìn)行細(xì)菌涂片染色檢查、細(xì)菌接種培養(yǎng)、制備凝集抗原、免疫動(dòng)物制備診斷血清及測(cè)定診斷血清效價(jià)等。在做抗菌藥物敏感試驗(yàn)時(shí)，也需常備-套對(duì)各種抗菌藥物“敏感”的對(duì)照菌株，使學(xué)生學(xué)會(huì)判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。對(duì)這些菌種的妥善保管和保存，是良好的實(shí)驗(yàn)室管理和實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的重要保證。

        一、保管

        由于實(shí)驗(yàn)室中保存的菌種大多對(duì)人體具有致病性，經(jīng)多次移種又易被污染和發(fā)生變異，做好安全及質(zhì)量管理至關(guān)重要，主要應(yīng)做到以下幾點(diǎn)。

        1.1專人負(fù)責(zé) 菌種保管應(yīng)專人負(fù)責(zé)，存放于加鎖的冰箱中。保管人應(yīng)具備高度的責(zé)任心，明確職責(zé)，嚴(yán)格執(zhí)行有關(guān)的規(guī)章制度，以確保菌種安全。

        1.2詳細(xì)登記 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有-本詳細(xì)登記本，對(duì)各種菌種進(jìn)行詳細(xì)登記，內(nèi)容包括菌種的名稱，編號(hào)，數(shù)量，分離日期，鑒定者，細(xì)菌的形態(tài)染色，培養(yǎng)生化特性，抗原結(jié)構(gòu)，動(dòng)物致病力等，并注明使用、移種及銷毀的情況和原因。

        1.3定期移種 對(duì)菌種的保管不僅要求菌種不死，還要力求其生物學(xué)性狀等不發(fā)生變異。各種菌種應(yīng)按規(guī)定時(shí)間定期移種。細(xì)菌在人工培養(yǎng)基上經(jīng)數(shù)代培養(yǎng)后，其形態(tài)、菌落、毒力等均易發(fā)生變異，因此，在每移種3次后應(yīng)做-次全面鑒定，檢測(cè)菌種有無污染和變異，如發(fā)現(xiàn)污染和變異時(shí)，應(yīng)及時(shí)處理。

        二、保存

        保存菌種應(yīng)根據(jù)細(xì)菌的培養(yǎng)特性、抵抗力等選擇適合的培養(yǎng)基，微生物實(shí)驗(yàn)室常用菌種的-般保存方法有以下幾種：

        2.1科面保存法

        2.1.1普通肉湯瓊脂斜面：腸道桿菌、葡萄球菌等營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌可接種于普通瓊脂斜面上，斜面底部應(yīng)加少許無糖肉膏液，以防干涸(但變形桿菌“OX”及傷寒桿菌“O’’菌株宜接種于斜面底部無肉湯的干燥的瓊脂斜面，以防變異)，用橡皮塞塞緊，置37℃培養(yǎng)18-24h后，放于4℃冰箱中，可保存1個(gè)月，每經(jīng)1個(gè)月需接種傳代1次。

        2.1 .2血液瓊脂斜面：鏈球菌及肺炎球菌的營養(yǎng)要求較高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良或不生長(zhǎng)，應(yīng)接種于血液瓊脂斜面上，電熱恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)生長(zhǎng)后，放4℃冰箱保存，鏈球菌需半個(gè)月-1個(gè)月接種1次;肺炎球菌因能產(chǎn)生自溶酶而導(dǎo)致自溶現(xiàn)象，需4d移種1次。肺炎球菌在人工培養(yǎng)基上經(jīng)數(shù)代培養(yǎng)后，其形態(tài)、菌落、毒力均易發(fā)生變異，在人工培養(yǎng)基上肺炎球菌很快失去莢膜，經(jīng)多代培養(yǎng)后其光滑型菌落可變?yōu)榇植谛停玖σ泊鬄榻档汀?/p>

        2.1.3雞蛋斜面：成分為新鮮全蛋、1%葡萄糖肉湯及甘油。少數(shù)沙門氏菌當(dāng)新從病人檢材中分離出來時(shí)，常具有Vi抗原，具有Vi抗原的細(xì)菌，有抵抗吞噬的作用，并保護(hù)細(xì)菌不被相應(yīng)抗體在補(bǔ)體參與下所溶解，故毒力較強(qiáng)。含有Vi抗原的沙門氏菌等，可接種于雞蛋斜面上，37℃培養(yǎng)18-24h，加無菌液體石蠟至斜面浸沒，再超出約1cm，置4℃冰箱，可保存3-6個(gè)月，Vi抗原經(jīng)長(zhǎng)期人工培養(yǎng)，也易消失。

        2.1.4呂氏血清斜面：白喉?xiàng)U菌可保存在該培養(yǎng)基上，其成分為l%葡萄糖肉湯(pH7 .4)1份，牛血清或兔血清(無菌)3份。白喉?xiàng)U菌在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速、旺盛，菌體形態(tài)典型，如在培養(yǎng)基中再加人5%-10%的中性甘油，則培養(yǎng)出的白喉?xiàng)U菌的異染顆粒更為明顯，但24h后即衰老成為多形態(tài)，很少有異染顆粒，菌體粗大3-4倍，置4℃冰箱可保存2周-1個(gè)月。

        2.2半固體穿刺保存法

        2.2.1普通半固體：大腸桿菌、葡萄球菌、綠膿桿菌等可穿刺接種于普通半固體培養(yǎng)基內(nèi)，37℃培養(yǎng)18-24h后，加1層無菌的液體石蠟，厚度約為1cm，置4℃冰箱可保存3-6個(gè)月。傳代移種時(shí)，將半固體菌種管傾斜，使液體石蠟流至-邊，再取菌移種于新的培養(yǎng)基。將沾有少數(shù)液體石蠟的接種環(huán)浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時(shí)，液體石蠟四濺，引起污染。

        2.2.2 3.5%高鹽半固體：副溶血性弧菌可保存在該培養(yǎng)基中，此菌適應(yīng)高濃度食鹽的環(huán)境，在不含食鹽的培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。培養(yǎng)基含食鹽的濃度以3%-3.5%為MAX宜。穿刺接種后，置37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-24h，在室溫下即可保存1個(gè)月。

        2.3羅氏培養(yǎng)基

        結(jié)核桿菌的營養(yǎng)要求較高，在培養(yǎng)基中需加人復(fù)雜的有機(jī)物如動(dòng)物血清、雞蛋、馬鈴薯、氨基酸以及磷、硫、鉀、鎂等無機(jī)鹽類才能生長(zhǎng)。結(jié)核桿菌的培養(yǎng)基種類很多，實(shí)驗(yàn)室MAX常用的是羅氏培養(yǎng)基。該菌生長(zhǎng)速度很慢，-般分裂速度為18hl代，電熱恒溫培養(yǎng)箱37℃需培養(yǎng)2-3周，置4℃冰箱可保存2-3個(gè)月。

        2.4厄肉培養(yǎng)基

        將牛肉渣裝于試管中，高約3cm，并加肉湯約srnL，比肉渣高1倍，在每管液面上加已溶化的凡士林，高約0.scm，高壓滅菌后備用。破傷風(fēng)桿菌等專性厭氧菌常保存在厄肉培養(yǎng)基內(nèi)。使用時(shí)先將培養(yǎng)基置于水浴中煮沸10而n，以驅(qū)除管內(nèi)存留的氧氣，然后將破傷風(fēng)桿菌接種于肉渣培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)37℃培養(yǎng)2-7d后，培養(yǎng)基呈輕度均勻混濁，肉渣部分消化，微變黑，產(chǎn)生少量氣體，4℃冰箱可保存2-3個(gè)月。

        2.5砂管保存法

        適用于有芽胞的細(xì)菌的保存，將過篩后的中性細(xì)砂烘干，裝人小試管內(nèi)約ICm高，橡皮塞塞緊，滅菌烘干備用。用無菌生理鹽水洗下培養(yǎng)基上的細(xì)菌培養(yǎng)物，制成懸液。吸此菌液約O.smL注人砂管內(nèi)，以砂土全部被浸濕為度。塞好管塞，放人干燥器內(nèi)抽干。然后放在裝有氯化鈣(吸水劑)的干燥瓶?jī)?nèi)，置冰箱保存?zhèn)溆?。需用菌種時(shí)，取-接種環(huán)砂土接種于適宜培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可。

        2.6普通培養(yǎng)基內(nèi)保存法

        將細(xì)菌的普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)物放于4℃冰箱或室溫冷暗處保存。用這種方法保存，只可保存數(shù)天，久之容易變異甚至死亡。-般只作暫時(shí)保存用。